过氧化氢酶试验（蛙白细胞内过氧化氢酶的显示的原理,步骤）

本文目录

• 蛙白细胞内过氧化氢酶的显示的原理,步骤
• 细菌淀粉酶和过氧化氢酶的定性测定注意事项
• 什么是细菌的接触酶实验
• 过氧化氢酶活力的测定
• 过氧化氢酶试验没有气泡产生什么原因
• 过氧化氢酶实验用的过氧化氢浓度为（），要求现用现配
• 实验报告用过氧化酶探究对酶活性的影响
• 过氧化氢酶活性的测定
• 过氧化氢酶探究pH值对酶活性的影响实验步骤
• 触酶试验的原理

蛙白细胞内过氧化氢酶的显示的原理,步骤

一、实验原理：

过氧化氢酶又称触酶，具有过氧化氢酶的细菌，能催化过氧化氢成为水和原子态氧，继而形成氧分子，出现气泡。

二、试剂与器材： 

1 、菌种：金黄色葡萄球菌和涟球菌。 

2 、试剂：3 ％过氧化氢溶液（临用前配制）。 

3 、器材：洁净玻片。

三、操作步骤：

分别挑取固体培养基上的待检菌落，置于洁净玻片上，滴加 3 ％过氧化氢溶液数滴，观察结果。

四、试验结果：

于半分钟内有气泡产生者为阳性，不产生气泡者为阴性。本试验金黄色葡萄球菌为阳性，涟球菌为阴性。

五、注意事项： 

1、3%过氧化氢溶液要新鲜配制。 

2、不宜用血琼脂平板上生长的菌落，因红细胞含有触酶，可致假阳性反应。 

3、取对数生长期的细菌。

细菌淀粉酶和过氧化氢酶的定性测定注意事项

试验使用的培养基，试验温度和湿度。1、试验使用的培养基：在进行细菌淀粉酶的定性测定时，需要使用含有淀粉的培养基，如土豆培养基或淀粉培养基，在制备培养基时，需要按照要求进行配制和灭菌。2、试验温度和湿度：细菌生长的最适温度和湿度因菌种而异，在进行试验时，需要将培养皿放置在适宜的温度和湿度条件下，以保证细菌的正常生长和繁殖。

什么是细菌的接触酶实验

接触酶实验也叫做触媒实验或者过氧化氢酶实验，一般用来鉴别细菌的类型。（1）原理：具有过氧化氢酶的细菌，能催化过氧化氢生成水和新生态氧，继而形成分子氧出现气泡。（2）试剂：3％过氧化氢溶液。（3）方法：取槽置于洁净的试管内或玻片上，然后加3％过氧化氢数滴；或直接滴加3％过氧化氢于不含血液的细菌培养物中，立即观察结果。（4）结果：有大量气泡产生者为阳性。不产生气泡者为阴性。（5）应用：革兰阳性球菌中，葡萄球菌和微球菌均产生过氧化氢酶，而链球菌属为阴性，故此试验常用于革兰阳性球菌的初步分群。以上，希望能帮到你。

过氧化氢酶活力的测定

过氧化氢酶活力的测定是基于其催化分解过氧化氢的能力。过氧化氢酶可以将H2O2分解成H2O和O2，反应式为：2H2O2 → 2H2O + O2

过氧化氢酶的活力可以通过测定上述反应速率来确定。一般情况下，实验会将一定浓度的H2O2溶液加入含有过氧化氢酶的试剂中，然后测定反应前后H2O2浓度的变化，进而计算出过氧化氢酶的活力。

过氧化氢酶活力的测定方法：

• 过氧化氢（H2O2）溶液：通常使用30%的H2O2溶液，需要在实验中稀释至合适的浓度。

• 过氧化氢酶溶液：可以从商家购买，也可以从细胞或组织中提取。提取方法可以参考相关文献。

• 磷酸盐缓冲液：pH值为7.0的磷酸盐缓冲液。

• 将磷酸盐缓冲液加入试管中，加入适量的过氧化氢酶溶液，并充分混合。

• 在反应开始之前，加入一定量的H2O2溶液。

• 立即开始计时，并记录反应开始时的H2O2浓度。

• 反应一段时间后（通常为30秒），停止反应，并记录此时的H2O2浓度。

• 通过浓度变化计算出反应速率，并据此计算出过氧化氢酶的活力。

过氧化氢酶活力测定是一种常见的生物学实验方法，可以用于研究许多领域，例如细胞代谢、环境污染和疾病诊断。通过上述测定方法可以得出过氧化氢酶的活力值，为后续研究提供基础数据。

过氧化氢酶试验没有气泡产生什么原因

肠杆菌科的所有细菌，包括大肠埃希菌都能产生过氧化氢酶，所以作于双氧水时会产生气泡。这个你查任何一本微生物的课本都会明确告诉你：“大肠杆菌触酶（过氧化氢酶）试验阳性”。此外，细菌中触酶试验阴性的相对较少，常见的有链球菌等，大部分细菌触酶试验阳性。楼上同学的老师估计是中学老师吧，估计非微生物学专业的，害人不浅啊！

过氧化氢酶实验用的过氧化氢浓度为（），要求现用现配

【答案】：3%解析：过氧化氢酶试验(catalase test)，用于细菌鉴定中的生化试验之一。具有过氧化氢酶的细菌，能催化过氧化氢生成水和新生态氧，继而形成分子氧出现气泡；3%过氧化氢溶液：临用时配制；挑取固体培养基上菌落一接种环，置于洁净试管内，滴加3%过氧化氢溶液2mL，观察结果；于半分钟内发生气泡者为阳性，不发生气泡者为阴性；革兰氏阳性球菌中，葡萄球菌和微球菌均产生过氧化氢酶，而链球菌属为阴性，故此试验常用于革兰阳性球菌的初步分群。

实验报告用过氧化酶探究对酶活性的影响

影响酶活性的因素”是高中现行生物学课本中的一个实验内容，也是第1个探究性实验。但是，教材中所介绍的实验药品（α-淀粉酶）价格较贵，实验设计思路为定性实验。能否改进实验设计方案，使其不仅能培养学生的实验技能和实验设计能力，通过实验过程理解影响酶活性的因素的知识内容，而且促使学生积极参与探究活动，养成实事求是的科学态度和一丝不苟的科学探究精神呢？为此，笔者进行了一些有益的尝试。1 实验设计1．1 选用过氧化氢酶作为实验探究对象 过氧化氢是细胞中某些化学反应的副产物，具有强氧化性，如果不及时除去或分解，就会杀死细胞。在动物的肝细胞和血细胞中含有较多的过氧化氢酶，它可以促进过氧化氢分解。由于过氧化氢酶容易获得且催化反应的现象明显，所以选用过氧化氢酶作为实验探究对象。1．2 设备准备 实验用具有：细胞培养瓶（代替反应小室）、刻度吸管、镊子、水槽、25 mL量筒；反应底物为30％H2O2，也可以用原包装双氧水配制的3％H2O2，但反应速度慢，现象不太明显，反应时间长。实验中需要 H2O2酶滤纸片，制作方法是：将 10 g鲜肝剪碎，置于研钵中充分研磨，加入200 mL蒸馏水制成鲜肝液。然后，将滤纸剪成1 cm2的小片，平展在表面皿中，用鲜肝液浸泡l min后使用。配制缓冲液，方法是：将17.96 g Na2HPO4·7H2O在 1 000 mL容量瓶内溶于蒸馏水中，加水至刻度，配制成0.067 mol／L Na2HPO4溶液。将9.07 g KH2PO4在1 000 mL容量瓶内溶于蒸馏水中，加水至刻度，配制成0.067 mol／L KH2PO4溶液。用上述两种溶液配制pH5、pH6、pH7、pH8缓冲液如下： 单位：mLpH 5 6 7 8 0.067 mol／L KH2PO40.067 mol／L KH2PO4 199 2080 6040 9551．3 实验方案 参照美国BSCS教材中的实验方案，经过1个多月的摸索，改进原有实验装置，制定出简单易行且定量效果好的实验步骤如下：l）向水槽中加水至将满为止。2）将大小相同的8片滤纸片在鲜肝液中浸泡l min，然后用镊子夹起滤纸片，靠在培养皿壁上，使多余的酶液流尽。3）用镊子将2片酶滤纸片小心地放入细胞培养瓶（用作反应小室）的一侧内壁上，使酶滤纸片粘在内壁上。注意滤纸片不要碰到反应小室的瓶口。4）将细胞培养瓶立起，贴有酶滤纸片的一侧壁冲上，小心加入 pH＝5的缓冲液 2 mL，然后再加入 2 mL 30％的H2O2溶液，切勿使上述混合液接触贴在内壁上的滤纸片。将小室塞紧。5）将25 mL量筒横放于水槽中使之灌满水，若有气泡，将其轻轻倾斜，小心赶出气泡。将量筒倒立，使筒口一直处于水中。6）小心将细胞培养瓶平放在水槽中的水里，注意反应小室贴有滤纸片的内壁应在上面，将量筒移至细胞培养瓶口上伸出的玻璃管上方，实验过程中要一直扶着量筒，保证量筒的位置不动。7）将细胞培养瓶小心旋转180度，使H2O2溶液接触酶滤纸片。同时开始计时，在 30 S时，读取量筒水平面刻度并作出标记后记录。8）反复冲洗反应小室后，重复上述实验过程，测量在 pH6、pH7、pH8时过氧化氢在酶的催化下所释放的气体量。注意：所有的实验中都要严格保证于净，不应该有上一次反应后的剩余溶液，每次试验完后，应充分冲洗，然后用相应的缓冲液再冲洗一遍。2 教学过程2．1 引入新课 由上节课的实验操作引出本节课的实验内容，启发学生思考实验操作要达到的目的，为减少学生实验操作过程的盲目性做好铺垫。学生作出温度和pH影响酶的活性的假设后，教师介绍本节课所用的酶和底物，以及过氧化氢酶在生物体内的分布情况。然后播放自制录像《pH过氧化氢酶活性的影响》，边看录像边讲解实验用具，但是不强调实验操作过程中的注意事项，意在训练学生的观察能力、对问题的敏感能力、综合分析能力。如果某一学生只是在被动地看录像而不是边看边思考，在自己具体实验过程中会遇到很多问题，使实验进程不顺利。而在看录像过程中积极思考的学生，实验每一步的操作应该注意的问题都会关注到，实验速度快且实验结果准确。2．2 学生分组实验 学生模仿录像中的操作进行自主实验，既需要分工合作，更需要在操作中发现问题并及时解决问题。这个过程中教师巡视学生的操作情况并适时地参与讨论，针对不同组的情况，提出一些小问题，引导学生进行深层次的思考。实验中教师巡视，既可以了解学生实验的速度、实验过程中出现哪些不可预计的问题，使自己很好地驾驭课堂教学，又作为学习者参与讨论过程，营造宽松和谐的学习氛围。2．3 交流和讨论 实验结束后，教师请各组学生代表汇报实验结果，确定过氧化氢酶的最适pH，在交流过程中学生会发现不同组得出的实验结论可能有所不同。综合全班的实验结果，还是可以看出过氧化酶的最适宜pH是7。然后教师告诉学生，科学家研究得出：肝脏中过氧化酶的最适pH是6.8，接近于7。但是大家的实验结果各不相同，由此引出实验讨论的问题：实验过程中有哪些因素可能造成实验误差？学生针对自己的实验操作过程进行充分的讨论，总结出影响实验结果的一些因素。这是学生回忆实验操作进行自我反省和相互评价的过程，但是很少有学生对教师提供的实验方案表示质疑，为此教师又提出另外一个讨论题：你认为该实验设计中有哪些不完善的地方？应如何改进实验装置或方案，使实验结果更准确？一个小小的问题点燃了学生质疑的火花，大家各抒己见，提出改进实验方案的建议，学生的发散思维和创新思维在此体现得淋漓尽致。教师对学生的发言进行了充分的肯定，激发了学生的学习热情和积极性。因为实验步骤中只设计了pH为5－8的实验，所以教师又提出一个简单的问题：如果想得出不同的pH与酶活性关系的变化曲线，应该如何设计？由此引导学生思考实验目的不同，实验设计的步骤和方案可能有所不同，实验设计需要有针对性。2．4 实验设计思路的迁移──设计并交流温度对酶活性影响的实验方案 进行充分的讨论后，教师又提出问题：知道了不同的pH与酶活性的关系，现在请同学们设计“探究温度如何影响酶的活性”的实验方案。提醒学生注意底物和相应的实验装置的选择。给学生一段时间思考后，教师请学生交流实验方案。有的学生在教师提供的实验用具的基础上设计，有的学生利用化学中制备氢气的启普发生器作为反应体系，这样实验结果更加准确。但有的学生考虑得更加全面，想到H2O2在高温的情况下也会加速分解，用过氧化氢酶和H2O2探究温度的影响不太适合，所以改用淀粉作底物，唾液淀粉酶作催化剂。在这个交流过程中，学生相互评价实验的可行性，并且给予每组学生一些合理的建议。该过程充分体现了学生深入研究问题的能力。3 教学小结和反思生物科学实验中可以对学生进行探究过程的训练。包括观察、提出问题、进行假设、设计方案并进行实施、收集分析解读数据、得出合理结论、表达结果等。是学习者运用判断思维、逻辑思维进行学习的过程。在这个过程中，要很好地把握教师的主导作用和学生的主体作用，保证课堂教学的高效优质。避免出现盲目而无序，热闹而无获的情况。探究教学对教师驾驭课堂和教学内容的能力都提出了更高的要求。因此在授课前教师必须精心准备，要预见到可能发生的所有情况，尤其是实验安全性问题。对实验结果的分析讨论和自主设计实验是本节课的重点，在这个过程中培养了学生多方面的能力：与他人的合作意识、分析综合的思维能力、表达与交流的能力、实事求是的科学态度、自我评价与评价他人的能力、创新能力等。但是能力的培养不是一朝一夕的事情，应该渗透到每堂课的教学中．渗透到教学的点点滴滴，朱意曾说过“读书无疑，需教有疑，有疑者无疑，至此方是长进”，在教学过程中，精心设问，周密安排，每堂课要给学生提供施展自己才华的舞台，长此以往，学生的各种能力会逐步得到提高乃至升华。探究过程中教师应该注意自己扮演的是和学生平等的学习者而不是高高在上的知识的传授者，和学生共同探讨，可能从学生那里会获得更多的灵感和信息，反过来促进自己的教学。如果时间允许，可以用2节课的时间，给学生提供必需的实验器材和用品，分组实施自己设计的“温度对酶活性的影响”方案，检验自己方案的可行性。这是一个自我价值的实现过程，相信在这一过程中更能激发学生学习生物学的热情，是培养学生学习生物学兴趣不可多得的契机。

过氧化氢酶活性的测定

过氧化氢酶的活性测定——紫外吸收法【原理】H2O2在240nm波长下有强烈吸收，过氧化氢酶能分解过氧化氢，使反应溶液吸光度(A240)随反应时间而降低。根据测量吸光率的变化速度即可测出过氧化氢酶的活性。【仪器与用具】 紫外分光光度计；离心机；研钵；250ml容量瓶1个；0.5ml刻度吸管2支，2ml刻度吸管1支；10ml试管3支；恒温水浴；【试剂】0.2mol/L pH7.8磷酸缓冲液（内含1%聚乙烯吡咯烷酮）；0.1mol/L H2O2（用0.1mol/L高锰酸钾标定）。 【方法】 1.酶液提取：称取新鲜小麦叶片或其它植物组织0.5g置研钵中，加入2～3ml 4℃下预冷的pH7.0磷酸缓冲液和少量石英砂研磨成匀浆后，转入25ml容量瓶中，并用缓冲液冲洗研钵数次，合并冲洗液，并定容到刻度。混合均匀将量瓶置5℃冰箱中静置10min，取上部澄清液在4000rpm下离心15min，上清液即为过氧化氢酶粗提液。5℃下保存备用。2.测定：取10ml试管3支，其中2支为样品测定管，1支为空白管，按表40-2顺序加入试剂。表40-2 紫外吸收法测定H2O2样品液配置表管 号 S1 S2 S3 粗酶液(ml) 0.2 0.2 0.2 pH7.8磷酸(ml) 1.5 1.5 1.5 蒸馏水(ml) 1.0 1.0 1.025℃预热后,逐管加入0.3ml 0.1mol/L的H2O2，每加完一管立即记时，并迅速倒入石英比色杯中，240nm下测定吸光度，每隔1min读数1次，共测4min，待3支管全部测定完后，按下式计算酶活性。 3.结果计算： 以1min内A240减少0.1的酶量为1个酶活单位（u）。 过氧化氢酶活性(u/gFW/min)= 式中 A240 = AS0－ AS0—加入煮死酶液的对照管吸光值； AS1, AS2—样品管吸光值； Vt—粗酶提取液总体积（ml）； V1—测定用粗酶液体积（ml）； FW—样品鲜重（g）； 0.1—A240每下降0.1为1个酶活单位（u）； t—加过氧化氢到最后一次读数时间（min）。

过氧化氢酶探究pH值对酶活性的影响实验步骤

①实验目的是探究pH对过氧化氢酶活性的影响，故先在1号、2号、3号试管中各加入2mL新配制的体积分数为3%的过氧化氢溶液，再向l号试管内加入l mL蒸馏水，向2号试管内加入1mL（等量）氢氧化钠溶液，向3号试管内加入1mL（等量）盐酸溶液，并振荡试管。

②据题分析可知，向1号、2号、3号试管内各滴入2滴鸡肝研磨液。

③气泡的多少反应了过氧化氢酶活性的高低。仔细观察各试管内产生气泡的多少，并记录。

在最适pH时，酶的活性最高；当高于或低于最适pH时，酶的活性都会降低．故实验结果为：1号试管内产生的气泡较多；2号和3号试管内产生的气泡较少。

除pH外，还有其它环境因素会影响过氧化氢酶的活性，就此提出相关研究课题：探究温度对过氧化氢酶活性的影响。故答案为：

①1mL（等量）氢氧化钠溶液（试剂量和试剂名缺一不给分） 1mL（等量）盐酸溶液（试剂量和试剂名缺一不给分）。

②鸡肝研磨液

③产生气泡较多

探究温度对过氧化氢酶活性的影响（或其他合理答案）点评：本题考查影响酶活性的因素及探究实验，重点是考查影响酶活性的探究实验，要求学生掌握实验设计的原则，准确判断实验的自变量、因变量和无关变量。

同时要掌握影响酶促反应速率的因素。酶作为生物催化剂，不仅具有一般无机催化剂的特点，还具有专一性、高效性和温和性等特点，所有这些内容都是生物实验的好素材．以酶的特性为知识背景，可以较好的测试学生的实验知识及操作能力。

扩展资料：

动力学方法

测定一定时间内所起的化学反应量。

①比色法 如果酶反应的产物可与特定的化学试剂反应而生成稳定的有色溶液，且生成颜色的深浅与产物的浓度在一定的范围内有线性关系可用此法。

如蛋白酶的活力测定：蛋白酶可水解酪蛋白，产生的酪氨酸可与福林试剂反应生成稳定的蓝色化合物，在一定的浓度范围内，所生成蓝色化合物颜色的深浅与酪氨酸的量之间有线性关系，可用于定量测定。

②量气法 主要用于有气体产生的酶促反应。如氨基酸脱羧酶、脲酶的活力测定。产生的二氧化碳量可用特制的仪器如瓦氏呼吸仪测定之。根据气体变化和时间的关系，即可求得酶反应的速度。

③滴定法 如果产物之一是自由的酸性物质可用此法。如脂肪酶催化脂肪水解，脂肪酸的增加量代表脂肪酶的活力。

④分光光度法 利用底物和产物光吸收性质的不同，可直接测定反应混合物中底物的减少量或产物的增加量。几乎所有的氧化还原酶都使用该法测定。

如还原型辅酶Ⅰ(NADH2)和辅酶Ⅱ(NADPH2)在340nm有吸收，而NAD和NADP在该波长下无吸收，脱氢酶类可用该法测定。该法测定迅速简便，自动扫描分光光度计的使用对酶活力的快速准确的测定提供的极大的方便。

触酶试验的原理

触酶试验原理：触酶又称过氧化氢酶，具有过氧化氢酶的细菌，能催化过氧化氢成为水和原子态氧，继而形成氧分子，出现气泡。

试剂药品

1．50mmol／lpH7．0的磷酸缓冲液

2．0．3％H202：吸0．5ml30％H202加入pH7．0的磷酸缓冲液至50ml

3．0．2％愈创木酚：秤0．2g愈创木酚加入pH7．0的磷酸缓冲液至100ml

扩展资料：

实验步骤

酶液的制备

1、称取叶片 0.25g ，加入5倍量的（M/V）pH7.0 的PBS冰浴研磨 15000r/min

离心15min取部分上清液经适当稀释后用于酶活性测定。

2、CAT活性的测定

在3ml的反应体系中，包括0．3％H2021ml，H201．95ml，最后加入0．05ml酶液

启动反应，测定波长240nm处的OD降低速度。将每分钟OD减少0．01定义为1个活力单位。

3、POD活性的测定

在3ml的反应体系中，包括0．3％H2021ml，．0．2％愈创木酚0．95ml，pH7．0的PBS1ml，最后加入0．05ml酶液启动反应，记录470nm处OD增加速度。将每分钟OD增加0．01定义为1个活力单位。

4、用考马斯亮蓝G－250法测定蛋白含量．